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反相色谱柱使用和维护
作者:河北奥博 上传时间:2015-11-20 14:33:34
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反相色谱柱是我们应用最广泛的色谱柱类型, 反相色谱柱键合相主要包括:C18C8C4PhenylaQ、等。对于以上反相色谱柱,我们在使用及维护的时候可以按照同样的操作方式:

1、在条件允许情况下,在使用前最好对新色谱柱按照说明书方法进行柱效测试。以确保色谱柱的正常。

2、所有硅胶基质色谱柱使用温度应低于60℃。

3、样品

最好将样品溶解在流动相或极性相近的溶剂中。如果使用梯度洗脱,则需要将样品溶解在初始流动相或极性相近的溶剂中。样品溶液不应含有任何颗粒物,最好使用0.5μm或更小粒径的滤膜过滤。样品溶液如果使用强溶剂(例如,流动相为水,样品溶剂为甲醇),为达到较好峰形,需要降低进样量(以250x4.6mm规格为例,小于10μL)。

4、流动相

所有流动相,特别是含有缓冲盐的流动相,最好当日实验当日配制;如果使用了前日配制的流动相,请确保流动相pH值没有变化,并确保流动相没有长菌。 流动相的pH值取决于您的应用和色谱柱填料类型。我们建议在所有的色谱柱尽量在pH2~8范围内使用。请尽量避免在常规流动相中使用很高比例的水(>95%)作为流动相,可能会造成保留时间的不稳定或者色谱柱键合相的损害。如果使用高比例水或者100%水相为流动相,建议使用亲水柱,例如Hypersil GOLD aQSyncronis aQ、AcclaimPolar Advantage Ⅱ等色谱柱。

5、色谱柱平衡

在进行分析之前,请使用至少20倍柱体积的流动相冲洗色谱柱,以使色谱柱达到平衡。

色谱柱的柱体积可以通过以下公式估算:

V=0.68πr2

V为色谱柱柱体积(mL),r为色谱柱内径(cm),L为色谱柱长度(cm)。

6、色谱柱保护

对于的样品以及组分未知的样品,请尽量使用在线滤器或保护柱,如果可能,使用SPE小柱对样品进行前处理是更好的选择。上述做法可以有效延长色谱柱使用寿命。

7、色谱柱清洗

常规清洗:

在储存色谱柱之前,请使用至少20倍柱体积的不带缓冲盐的流动相冲洗色谱柱(去除缓冲盐),再用更强的溶剂冲洗色谱柱(去除强保留成分,反相色谱通常使用甲醇或乙腈),然后使用合适的溶剂储存色谱柱。

清洗强保留污染物:

使用如下试剂依次清洗色谱柱

20倍柱体积不带缓冲盐的流动相;

20倍柱体积甲醇或乙腈;

20倍柱体积异丙醇;

20倍柱体积正己烷或氯仿;

20倍柱体积异丙醇;

20倍柱体积甲醇或乙腈。

8、 色谱柱保存

反相色谱柱,保存溶剂通常是含至少30% 有机相的水溶液,也可在常规清洗后直接保存在有机相中。

如果需要长时间储藏,则需要使用较高比例的有机相(有机相比例至少大于50%)
完。