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正相色谱柱使用和维护
作者:河北奥博 上传时间:2015-11-20 14:35:29
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正相色谱柱键合相主要包括:Amino(氨基柱)Silica(硅胶柱)Cyano(氰基柱)等。(例如Hypersil Gold Amino、Syncronis Amino、Hypersil Gold Silica、 Hypersil Gold CN )当然,对于以上色谱柱,我们既可以在正相条件(烷烃,醇为流动相)使用,也可以在乙腈/水的HILIC机理下使用。今天主要讨论正相条件下的使用维护。

1、在条件允许情况下,在使用前最好对新色谱柱按照说明书方法进行柱效测试。以确保色谱柱的正常。

2、所有硅胶基质色谱柱使用温度应低于60℃。

3、样品

最好将样品溶解在流动相或极性相近的溶剂中。如果使用梯度洗脱,则需要将样品溶解在初始流动相或极性相近的溶剂中。样品溶液不应含有任何颗粒物,最好使用0.5μm或更小粒径的滤膜过滤。样品溶液如果使用强溶剂(例如,流动相为正己烷,样品溶剂为乙醇),为达到较好峰形,需要降低进样量(以250x4.6mm规格为例,小于10μL)。

4、流动相

正相色谱所用溶剂通常为氯仿、正己烷、乙腈、甲醇、乙醇等。严禁使用与色谱柱保存溶液不互溶的溶剂作为流动相。 对于某些特殊的应用(例如亲水相互作用色谱),要在流动相中使用与色谱柱保存溶剂不互溶的溶剂(例如水)作为流动相时,须使用20倍柱体积的异丙醇冲洗色谱柱后,方可使用流动相进行平衡。 所有流动相,最好当日实验当日配制,并使用2μm滤膜过滤。

5、 色谱柱平衡

在进行分析之前,请使用至少20倍柱体积的流动相冲洗色谱柱,以使色谱柱达到平衡。

色谱柱的柱体积可以通过以下公式估算:

V=0.68πr2

V为色谱柱柱体积(mL),r为色谱柱内径(cm),L为色谱柱长度(cm)。

6、色谱柱保护

对于的样品以及组分未知的样品,请尽量使用在线滤器或保护柱,如果可能,使用SPE小柱对样品进行前处理是更好的选择。上述做法可以有效延长色谱柱使用寿命。

7、色谱柱清洗

常规清洗:

在储存色谱柱之前,请用强的溶剂冲洗色谱柱(去除强保留成分,正相色谱柱中通常使用乙醇),然后使用合适的溶剂储存色谱柱。

清洗强保留污染物:

如果色谱柱柱效出现大幅下降,且柱效下降可能由于强保留物质聚积所导致时,使用如下试剂依次清洗色谱柱

20倍柱体积正己烷;

20倍柱体积异丙醇;

20倍柱体积乙腈;

20倍柱体积水;

20倍柱体积乙腈;

20倍柱体积异丙醇;

20倍柱体积正己烷。

8、 色谱柱保存

正相相色谱柱,保存溶剂通常是含乙醇的正己烷,也可在常规清洗后直接保存在乙醇中,切岂保存在含纯水的流动相中,这将导致色谱柱性能的迅速下降。如果需要长时间储藏,则需要注意色谱柱密封,避免保存溶液挥发。
完。